гепатит с - лечение гепатита - лекарства гепатит - эффективное лечение гепатита с - вирусный гепатит
ГЕПАТИТ С — лечение эффективно и доступно!
Звоните (495) 543-52-09 с 9 до 19 часов по Московскому времени. Воскресенье — выходной. 8-926-530-92-62
ИССЛЕДОВАНИЕ ВОЗДЕЙСТВИЯ  ВОДНОГО РАСТВОРА СО СТАБИЛИЗИРОВАННЫМ
ОТРИЦАТЕЛЬНЫМ ОКИСЛИТЕЛЬНО-ВОССТАНОВИТЕЛЬНЫМ ПОТЕНЦИАЛОМ (ВРСО ОВП)
 ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ ИНФЕКЦИИ, ВЫЗВАННОЙ ПАТОГЕННЫМ ВАРИАНТОМ ВИРУСА
ПТИЧЬЕГО ГРИППА  A (H5N1) В КУЛЬТУРАХ КЛЕТОК
ОТЧЕТ

      Появление  в Новосибирской области Российской Федерации патогенного для птиц вируса гриппа А птиц (H5N1) и дальнейшее его распространение по многим областям и регионам  Российской Федерации  представляет реальную угрозу сельскому хозяйству России, в частности, для птицеводческих ферм страны. Кроме того, возрастает  реальная угроза появления нового пандемического штамма вируса гриппа человека.   Как свидетельствуют  наши данные, существующие противогриппозные средства в полной мере не могут обеспечить эффективного лечения больных гриппом. Что касается инфицированных патогенными штаммами вируса гриппа А птиц,   то в России до сих пор  на практике не использовали каких-либо средств лечения. Представляется важным проводить поиск новых эффективных препаратов для лечения и профилактики гриппа у птиц, которые могут оказаться эффективными и в отношении инфекции, вызванных ожидаемым пандемическим штаммом.

Материал и методы

Штамм вируса гриппа птиц А (H5N1).   В работе использовали высоко патогенный штамм вируса гриппа птиц А (H5N1), выделенный нами от умершей домашней курицы в Новосибирской области во время эпизоотии в июле 2005 года. Штамм вируса гриппа оказался высоко патогенным для культур клеток  почки эмбриона свиньи (линия клеток СПЭВ), инфекция в которых сопровождалась развитием интенсивного цитопатического эффекта. В работе использовали инфекционные дозы вируссодержащего материала, равные 10, 0ТЦД50/0, 2 мл.

Исследования противовирусной активности ВРСО ОВП проводили в культурах клеток СПЭВ, выращенных в виде однодневного монослоя в 48-луночных панелях  на питательной среде 199 с добавлением 10% сыворотки эмбриона телят и антибиотиков.

Препарат ВРСО ОВП был передан для исследования в герметически закрытых флаконах в виде светлой прозрачной жидкости.

Перед началом опыта все варианты ВРСО ОВП использовали для приготовления питательной среды, осторожно вращательными движениями флакона в горизонатльном положении растворяли 2 г сухой среды Игла (фирма Hy Clone), после полного растворения жидкую среду фильтровали медленно, чтобы фильтрат  слоился по стенке пробирки.   Затем осторожно к фильтрату добавляли 7% сыворотки эмбриона телят, антибиотики. Эта среда, содержащая ВРСО ОВП, служила как средой поддержки, так и питательной средой для инфицированных и неинфицированных культур клеток. В опытах использовали растворы ВРСО ОВП на питательной среде в соотношении 9 частей ВРСО ОВП и 1 часть обычной питательной среды, 1 часть ВРСО ОВП и 100 частей питательной среды.

В качестве контрольного опыта использовали те же культуры клеток  и вирус, который выращивали на среде, не содержащей ВРСО ОВП.
Использование вышеупомянутой дозы вируса гриппа позволяло учитывать окончательный результат через 24 и 96 часов после инфекции.
Результаты исследований учитывали по влиянию препаратов на жизнеспособность инфицированных гриппом клеток СПЭВ в сравнении с контрольными опытами,   в которых использовали только зараженные вирусом птичьего гриппа А культуры клеток, культуры клеток интактные и культуры клеток, обработанные  препаратами.

РЕЗУЛЬТАТЫ

Исследования по изучению  влияния ВРСО ОВП на жизнеспособность культур клеток СПЭВ, инфицированных вирусом гриппа А/H5N1 показали, что  оптимальным противовирусным  действием препарат ВРСО ОВП  обладал в случае внесения его в культуры клеток за 1 час до заражения вирусом. От 80% до 100%  клеток СПЭВ, инфицированных вирусом H5N1, в течение 48 часов от момента заражения сохраняли жизнеспособность, в то время как контрольные (необработанные ВРСО ОВП) культуры клеток полностью погибали в течение этого времени (табл. 1). Добавление питательной среды, приготовленной на основе ВРСО ОВП сразу же  после адсорбции вируса  способствовало сохранению 25 % процентов инфицированных клеток, а внесение ВРСО ОВП в культуры клеток через 1 час после заражения не приводило к появлению устойчивости  инфицированных клеток  к цитопатогенному действию вируса.

Представляло интерес изучить противовирусное действие ВРСО ОВП в более  близкие сроки после заражения вирусом гриппа птиц. С этой целью пробы культуральной среды отбирали через 24 часа после заражения вирусом, когда отчетливых явлений цитодеструкции не было  выявлено. Полученные данные представлены в табл. 2.

Показано, в частности,   что обработка культур клеток ВРСО ОВП за 1 час до заражения к 24 часам приводила к снижению продукции вируса на 4, 5 lg. Если же ВРСО ОВП вносили после адсорбции вируса  или через 1 час  после заражения культур клеток СПЭВ, то противовирусный эффект препарата снижался и составлял  2, 5 -3, 0 lg.  

Как видно из данных, представленных в табл. 2, через 72 часа после заражения  антивирусный эффект ВРСО ОВП в определенной степени сохранялся лишь в случае обработки клеток СПЭВ за 1 час до заражения вирусом, когда происходило 100-кратное снижение  продукции вируса инфицированными клетками.   Внесение ВРСО ОВП  сразу же после адсорбции вируса или через 1 час после заражения не дало положительных результатов  к 72 часам после инфекции.

Заключение

  1. Обнаружено противовирусное действие водного раствора со стабилизированным отрицательным окислительно-восстановительным потенциалом (ВРСО ОВП)  на инфекционные свойства вируса гриппа А/H5N1 птиц.
  2. Оптимальным противовирусным  действием препарат ВРСО ОВП  обладал в случае внесения его в культуры клеток за 1 час до заражения вирусом.
  3.  Противовирусная активность препарата ВРСО ОВП, внесенного за 1 час до заражения клеток  сохранялась  до 72 часов после заражения культур клеток вирусом гриппа А/H5N1, в то время как препарат был активен только в ранние сроки после инфекции в случае обработки клеток в момент инфицирования или через 1 час после заражения.

Табл. 1 Влияние  ВРСО ОВП  на жизнеспособность культур клеток СПЭВ, инфицированных вирусом гриппа А/H5N1.

Время обработки
культур клеток
ВРСО ОВП 

% выживших в результате инфекции вирусом H5N1 клеток СПЭВ  (спустя 48 часов после заражения)

1-й вариант

2-й вариант

Контроль вируса

За 1 час до заражения

100

80

0

После адсорбции вируса

25

0

0

Через 1 час после заражения

0

0

0

Табл. 2 Влияние ВРСО ОВП  на инфекцию, вызванную вирусом гриппа А/H5N1 в культурах клеток СПЭВ (24 часа после заражения клеток)

Время обработки культур клеток
ВРСО ОВП 

Титры вируса гриппа А/H5N1 в пробах среды отобранных из зараженных культур клеток через 24 часа после инфекции

В присутствии ВРСО ОВП 

Контрольный опыт

24 часа после инфекции

72 часа после инфекции

24 часа

72 часа

За 1 час до заражения

2, 0

5, 0

6, 5

7, 5

После адсорбции вируса

4, 5

7, 0

7, 0

7, 0

Через 1 час после заражения

3, 0

7, 5

6, 0

7, 5

Rambler's Top100
При цитировании информации активная ссылка на www.gepatitunet.ru обязательна!
© «Редокс Технологии». Все права защищены.
>